为了排除某些因素对PCR结果的影响，PCR实验需要对照实验。PCR的阳性对照是Marker，推测PCR产物长度，判断PCR产物是否是目的片段。PCR的阴性对照是PCR的空白管，除了模板不加之外，其成分与其他管一样，证明没有其他模板污染。由于目前所用的PCR仪器自动化程度较低，操作步骤较为繁杂，人为因素大，这就不可避免地会出现不同程度的误差。轻微的污染、加量的误差等均可导致结果较大的差异，甚至阳性和阴性出现两种迥然不同的结果。在分析测定工

在细胞培养的过程中支原体污染是一个让人头疼的问题。它如同一个“不速之客”，悄然潜入细胞培养体系，给我们的实验带来诸多困扰。你是否有过这样的经历，培养的细胞无声无息地就被毁掉了？实验数据很难重复？ 那么，当我们遭遇支原体污染时，该如何应对呢？今天，让我们一起来探讨这个困扰。 支原体是一种直径大小仅为0.1-0.3μm，无细胞壁，可轻松透过一般过滤膜混入培养系统中的最小最简单的原核生物，呈高度多形性，有球形、杆形、

质粒提取主要包括三个步骤：菌体扩繁、菌体裂解释放质粒DNA，和质粒DNA的分离与纯化。质粒提取主要有碱裂解法，煮沸裂解法，小量一步提取法等。 质粒提取方法中，最常用的是碱裂解法，它具有得率高，适用面广，快速，纯度高等特色。碱裂解法是根据共价闭合环状DNA与线性DNA的拓扑学结构差异来分离的。其原理是：在强碱环境（pH12.0-12.6）下，细菌的细胞壁和细胞膜被SDS破坏，基因组DNA和质粒DNA被释放出来，宿主细胞的蛋白质、染色体及线性DNA

一、线粒体基础知识 1、什么是线粒体？ 线粒体是一种双膜结构的细胞器，分布在几乎所有真核细胞中。它们负责将营养物质转化为化学能量（ATP），供细胞使用。 2、为什么说它是“半自主性”的？ 线粒体拥有自己的DNA和遗传体系，但与细菌类似，它们的基因组有限。除了某些特定的基因，大部分线粒体的蛋白质由细胞核DNA编码，在细胞质中合成后运输到线粒体内。 3、线粒体有哪些功能？ 除了能量转换，线粒体还参与细胞分化、信号转导、细胞周

由于不良的饮食和生活习惯，导致现代不少人成为了血栓性疾病的高风险人群。目前我国血栓性疾病领域呈现出高发病、高死亡、高致残、高复发这“四高”特征，患者总人数已达千万以上。 究竟什么是血栓性疾病？日常预防要注意哪些？现代医学是否有先进的干预措施呢？今天一文带你了解清楚。 沉默的杀手”：血栓性疾病 什么是血栓？ 通俗来讲，血栓就是血管中的「血块」堵住了身体各个器官血管通道。在正常生理状态下，人体通过自身的凝

4月24日，我们迎来了“世界实验动物日”，一个值得所有人静心思考、深刻铭记的时刻。在这个时刻，我们不仅缅怀那些为科学进步做出牺牲的实验动物，更要探讨如何更好地尊重生命，促进科学研究与伦理道德的和谐共生。 它们是科学的探路者 实验动物，这些不会言语的生命，在科学的征途中扮演着不可或缺的角色。从基础医学研究到新药开发，从疫苗试验到疾病模型构建，它们为人类健康事业的进步贡献了不可估量的力量。每一项重大医学突破

大家好，今天聊下做的aPCR数据可以进行分析，能不能用这个问题，判断 qPCR 数据是否可用需要考虑以下几个方面： 扩增曲线：扩增曲线应该呈现出典型的 S 型曲线，且曲线应该平滑，没有明显的锯齿状或平台期。 阈值线：阈值(threshold)一般是基线的标准偏差的10倍。阈值线应该位于扩增曲线的指数增长期，且应该在曲线的中部，不应过高或过低。 CT 值：CT 值(循环阈值)是指扩增曲线达到阈值线所需的循环数。CT 值应该在合理的范围内，一般来说，CT

细胞培养时，血清是否需要热灭活取决于具体的实验需求和细胞类型。一般来说，热灭活血清有以下一些考虑因素： 去除潜在的污染物：热灭活可以破坏血清中的补体、支原体等潜在的有害物质，减少对细胞的影响。 减少免疫反应：血清中的某些成分可能引发免疫反应，热灭活可以降低这种可能性。 稳定性：热灭活后的血清在储存和使用过程中可能更稳定，不易发生变质。 然而，热灭活血清也可能带来一些不利影响： 损失活性物质：某些血清中的

在所有RNA实验中，最关键的因素是分离得到全长的RNA。而实验失败的主要原因是核糖核酸酶（RNA酶）的污染。由于RNA酶广泛存在而稳定，一般反应不需要辅助因子。因而RNA制剂中只要存在少量的RNA酶就会引起RNA在制备与分析过程中的降解，而所制备的RNA的纯度和完整性又可直接影响RNA分析的结果，所以RNA的制备与分析操作难度极大。 在实验中，一方面要严格控制外源性RNA酶的污染；另一方面要最大限度地抑制内源性的RNA酶。RNA酶可耐受多种处理而不

PCR反应中的主要由引物、 4种三磷酸脱氧核苷酸(dNTP)、Mg2+、模板和Taq DNA聚合酶五个成份组成。各个组份都能影响 PCR 结果的好坏。 1 引物 PCR反应产物的特异性由一对上下游引物所决定。引物的好坏往往是PCR成败的关键。引物设计和选择目的DNA序列区域时可遵循下列原则： （1） 引物长度约为16-30 bp， 太短会降低退火温度影响引物与模板配对，从而使非特异性增高。太长则比较浪费，且难以合成。 （2）引物中G+C含量通常为40%-60%，可按下式粗略估计引

抗体是一种由浆细胞（效应B细胞）分泌，被免疫系统用来鉴别与中和外来物质如细菌、病毒等的大型Y形蛋白质，仅被发现存在于脊椎动物的血液等体液中，及其B细胞的细胞膜表面。抗体能识别特定外来物的一个独特特征，该外来目标被称为抗原。 1. 做流式的抗体和免疫组化的抗体是一样的吗? 不一定能通用。流式是用直接标记还是间接标记?如果是直接标记的话，那这个抗体一般不是FITC标记或者就是TRITC，PE之类的。如果恰好你的免疫组化，也是想用

分子克隆实验——无缝克隆 今天和大家讲讲无缝克隆常见的问题以及解决方法。 1.平板上很少或者没有克隆菌落 建议使用试剂盒附带的阳性对照，可排除试剂盒本身的影响。进一步判定，主要有以下可能的情况和建议： 01载体制备 线性化载体和插入片段的纯度不够，抑制反应。 02插入片段制备 1、引物设计不正确：同源臂15~25nt（不计算酶切位点）,CG含量40~60%。 2、线性化载体和插入片段的纯度不够，抑制反应。若线性化载体与插入片段已经过纯化，

菌种活化就是将保藏状态的菌种 放入适宜的培养基中培养 逐级扩大培养得到纯而壮的培养物 即获得活力旺盛的、接种数量足够的培养物 菌种发酵有一般需要2-3代的复壮过程，因为保存时的条件往往和培养时的条件不相同，所以要活化，让菌种逐渐适应培养环境。 01、一般菌种临时存放及活化 1.低温保存管应存放于－20℃ ~ －80℃之低温条件下。 2.准备 37℃之 70﹪酒精浴槽（只能在电气水浴槽中改放酒精，不可以火加温，以免危险；若以 37℃水浴取代

1增强剂 1. 激活剂：激活剂通过改善聚合酶的活性，让整个PCR过程焕发活力。10~100ug/ml BSA（牛血清白蛋白）就能在某些情况下提升聚合酶的稳定性和活性。 2. 保护剂：保护剂的作用在于防止模板DNA降解，确保DNA的完整性。如T4基因32蛋白能保护单链DNA不受核酸酶攻击。 3. 增效剂：增效剂能够提高引物与模板间的亲和力，从而提升扩增的特异性。1%~10%DMSO（二甲基亚砜）就是一种常用的增效剂，能使PCR反应在较高温度下进行，有助于解决模板二级结构引起

凡是需要做分子生物学实验的lab，肯定逃不了要买一台核酸定量的机器。目前最为流行的仪器是Nanodrop One，只需滴加一两微升的样品，按一下按钮，利用核酸的紫外吸收特性，即可得到浓度数据。近几年，以Qubit 4为代表的基于特异荧光染料法的仪器也逐渐进入科研人员的视野。那么，这两类仪器有什么区别，在使用时需要注意什么，如何根据实验室需求来选购？且听分解。 首先我们需要来理解两台仪器在核酸定量原理上的区别。正如方才所言，Nanodro

1. 平板长菌，但挑的单克隆菌落摇不起来？ 产生原因及解决办法： （1） 挑取的单克隆为杂菌，呈假阳性。出现这种情况的原因包括：①配制平板过程中，加入抗生素时温度过高致使抗生素灭活；②配制平板过程中，抗生素浓度过低；③平板培养时间太长导致抗生素失效。 （2）液体培养基的抗生素使用错误。 （3）液体培养基抗生素浓度过高，导致大肠杆菌生长缓慢。 （4）菌液保存太久，导致菌的活力过低。办法：重新划线涂板，挑取单克隆。 （5

荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization FISH）是一门新兴的分子细胞遗传学技术，是 20 世纪 80 年代末期在原有的放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性原位杂交技术。目前这项技术已经广泛应用于动植物基因组结构研究、染色体精细结构变异分析、病毒感染分析、人类产前诊断、肿瘤遗传学和基因组进化研究待许多领域。 FISH的基本原理是用已知的标记单链核酸为探针，按照碱基互补的原则，与待检材料中未知的单链核酸进行异性

实验技能分享免疫荧光 免疫荧光（Immunofluorescence，IF）是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一种强大的技术。它的原理是利用荧光标记的抗体作为探针对组织或细胞内的特定抗原进行定位和定性的分析。IF是一个很好的检测技术工具，用于研究感兴趣的产物如分子、蛋白质或糖蛋白的表达、定位、分布和迁移。 免疫荧光检测方法 直接免疫荧光：携带荧光素的抗体直接与抗原反应，形成抗原—荧光素标记抗体复合物。该法优点是较

在 Western Blot 实验中，内参是指用于标准化蛋白质表达水平的参照蛋白。内参通常是一种在细胞中普遍表达且表达水平相对稳定的蛋白质，其表达水平不受实验条件或处理的影响。我们跑Western blot除了想知道目的蛋白在细胞/组织中是否表达，更重要的是想知道表达量的高低。Western blot条带的灰度值能够帮我们判断目的蛋白的表达丰度，但前提是你最初的上样量是一样的，这个上样量指的可不是上样体积，而是你的蛋白浓度。所以我们需要内参来帮我们

在养细胞的过程中，总会有一些不速来客，它们总会不请自来，比如真菌、霉菌。但最令人头疼的还是支原体，它总是悄悄的来，对细胞造成极大的危害，今天就来认识一下支原体。 1支原体是什么？ 支原体是目前为止发现的最小的原核生物，具有以下特点： 1.形态结构与细菌相似，但又比细菌小，是介于细菌与病毒之间的微生物； 2.结构简单，只有细胞膜、细胞质、核糖体、DNA、可溶性RNA和一些其它细胞内含物，支原体的细胞器只有核糖体； 3.没有

糖尿病（Diabetes Mellitus，DM）是一种严重威胁人类健康的慢性疾病，该疾病本身对机体的损伤有限，其众多的并发症是人类健康的主要威胁，严重影响患者的生存质量，甚至危及患者生命。糖尿病周围神经病变（Peripheral Diabetes Neuropathy，PDN）是糖尿病的主要并发症之一，发病率（60-70%）高，对患者的损伤大，临床以对称性麻木、电击样疼痛、腹胀、汗出等表现为主，特别是持续性蚁（虫）爬状麻木和电击样疼痛严重影响患者的生存质量，后果极其严重

在基因功能研究中常用两种基础策略，功能减弱或缺失，功能增强或获得。 实现基因功能减弱，可以采用RNA干扰（RNAi）技术下调目的基因表达。在RNAi使用中，siRNA或shRNA的设计是关键。长度约为21bp的siRNA与蛋白形成RISC复合物，结合目的基因的mRNA，从而使其降解，达到降低基因表达水平的目的（注意RNAi是作用于mRNA水平）。但需要引起注意的是，如果目的基因在细胞中本体表达就较低的情况下（一般ΔCT＞16），就不适合用RNAi了。 随着CRISPR/Cas9技术的成

实验原理 细胞克隆形成实验是用来检测细胞增殖能力、侵袭性、对杀伤因素敏感性等项目的重要技术方法。 当单个细胞在体外增殖6代以上，其后代所组成的细胞群体，成为集落或克隆。其中细胞克隆形成率即细胞接种存活率，表示接种细胞后贴壁的细胞成活并形成克隆的数量。 贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆，而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。 克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。 克隆形成的目的

能力展示：动物造模、细胞实验、蛋白免疫实验、病理实验、分子实验、快速检测服务、组学服务、基因检测、生物信息服务等，祝大家科研顺利！

作为生物安全实验室的一级屏障，生物安全柜是科研或医疗实验室中重要的硬件装备，为了让实验室人员规范使用生物安全柜，现归纳出以下注意事项，希望大家在实际操作中尽可能规避风险。 生物安全柜是为操作原代培养物、菌毒株以及诊断性标本等具有感染性的实验材料时，用来保护操作者本人、实验室环境以及实验材料，使其避免暴露于上述操作过程中可能产生的感染性气溶胶和溅出物而设计的，在使用时一定要遵从其标准操作规程。 但是您

1、蛋白样品不能反复冻融； 2、蛋白样品应加蛋白酶抑制剂，以增加蛋白的稳定性（建议最好能多加几中种蛋白酶抑制剂）； 3、细胞水平要做Western Blot，一般地5×106个细胞提取的蛋白够就足Western Blot； 4、如果目标蛋白是膜蛋白和胞浆蛋白，所用的去垢剂就要温和得多，建议提取后最好加上NaF去抑制磷酸化酶的活性； 5、若转膜不完全，可以加大上样量，还有转移时你可以用降低电流延长时间，转膜液中甲醇的比例多加5－10％； 6、如果上样量超载，